微生物培養(yǎng)基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料，由于微生物具有不同的營養(yǎng)類型，對營養(yǎng)物質(zhì)的要求也各不相同，加之研究的目的不同，所以培養(yǎng)基的種類很多，使用的原料也各有差異，但從營養(yǎng)角度分析，微生物培養(yǎng)基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、無機鹽、生長素以及水分等。另外，培養(yǎng)基還應(yīng)具有適宜的pH值、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓。

       培養(yǎng)基是微生物實驗必不可少的，需要進行培養(yǎng)基配制和滅菌，那么微生物培養(yǎng)基該如何配制、培養(yǎng)基滅菌是否徹底，滅菌后如何儲存？今天小編和大家聊聊這個問題吧！

       培養(yǎng)基的制備

       1、配制溶液

       按照干粉培養(yǎng)基的配方，稱取合適的量，加入蒸餾水使其溶解，最后向容器內(nèi)加入剩余的水量。

       將上述已配好的培養(yǎng)基加熱至完全融化，并不斷攪拌，以免瓊脂糊底燒焦。

       2、調(diào)節(jié)pH值

       用pH試紙(或pH計、氫離子濃度比色計)測試培養(yǎng)基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH進行調(diào)節(jié)，直到調(diào)節(jié)到配方要求的pH值為止。

       3、過濾

       用濾紙、紗布或棉花趁熱將已配好的培養(yǎng)基過濾.用紗布過濾時，最好折疊成六層，用濾紙過濾時，可將濾紙折疊成瓦棱形，鋪在漏斗上過濾。

       4、分裝

       已過濾的培養(yǎng)基應(yīng)進行分裝.如果要制作斜面培養(yǎng)基，須將培養(yǎng)基分裝于試管中。如果要制作平板培養(yǎng)基或液體、半固體培養(yǎng)基，則須將培養(yǎng)基分裝于錐形瓶內(nèi)。分裝時，一手捏松彈簧夾，使培養(yǎng)基流出，另一只手握住幾支試管或錐形瓶，依次接取培養(yǎng)基。分裝時，注意不要使培養(yǎng)基粘附管口或瓶口，以免浸濕棉塞引起雜菌污染。裝入試管的培養(yǎng)基量，視試管和錐形瓶的大小及需要而定.一般制作斜面培養(yǎng)基時，每只15×150毫米的試管，約裝3～4毫升(1/4～1/3試管高度)，如制作深層培養(yǎng)基，每只20×220毫米的試管約裝12～15毫升。每只錐形瓶裝入的培養(yǎng)基，一般以其容積的一半為宜。

       5、加塞

       分裝完畢后，需要用合適的塞子堵住管口或瓶口，塞好塞子的試管和錐形瓶應(yīng)蓋上厚紙用繩或者皮筋捆札，準(zhǔn)備滅菌。

       6、制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基

       培養(yǎng)基滅菌后，如制作斜面培養(yǎng)基和平板培養(yǎng)基，須趁培養(yǎng)基未凝固時進行。

(1)制作斜面培養(yǎng)基。在實驗臺上放1支長0.5～1米左右的木條，厚度為1厘米左右，將試管頭部枕在木條上，使管內(nèi)培養(yǎng)基自然傾斜，凝固后即成斜面培養(yǎng)基。

(2)制作平板培養(yǎng)基。將剛剛滅過菌的盛有培養(yǎng)基的錐形瓶和培養(yǎng)皿放在實驗臺上，點燃酒精燈，右手托起錐形瓶瓶底，左手拔下棉塞，將瓶口在酒精燈上稍加灼燒，左手打開培養(yǎng)皿蓋，右手迅速將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，每皿約倒入10毫升，以鋪滿皿底為度.鋪放培養(yǎng)基后放置15分鐘左右，待培養(yǎng)基凝固后，再5個培養(yǎng)皿一疊，倒置過來，平放在恒溫箱里，24小時后檢查，如培養(yǎng)基末長雜菌，即可用來培養(yǎng)微生物。

       培養(yǎng)基滅菌效果的影響因素有哪些

       1、營養(yǎng)成分的保持

       濕熱滅菌時，微生物被殺死的同時，培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分也遭到了一定的破壞，特別是氨基酸和維生素。如在121℃，僅20min，就有59%的賴氨酸和精氨酸及其他堿性氨基酸被破壞，蛋氨酸和色氨酸也有相當(dāng)數(shù)量被破壞。在熱的作用下某些營養(yǎng)成分還可能因受熱而相互之間發(fā)生反應(yīng)，造成培養(yǎng)基中原有營養(yǎng)成分的數(shù)量變化，因而影響培養(yǎng)基質(zhì)量。

       2、微生物的耐熱性

       細菌芽孢的熱阻較大，滅菌所需要的時間取決于把細菌芽孢減少到所規(guī)定數(shù)目的時間。

       3、pH值

       pH值對微生物的耐熱性影響很大。pH值介于6.0~8.0時，微生物最不易死亡。pH<6.0時，微生物比較容易死亡，此時H+很容易滲入微生物的細胞，從而改變細胞的生理反應(yīng)，促使其死亡。所以培養(yǎng)基的pH越低，所需的時間也越短。

       4、培養(yǎng)基成分

       油脂、糖類及蛋白質(zhì)等組成的高濃度有機物會包于細胞的周圍形式一層薄膜、影響熱的傳導(dǎo)。而高濃度的鹽類、色素則削弱其耐熱性，滅菌較易。例如：大腸桿菌在水中加熱至60-65℃便死亡，在10%糖液中需70℃加熱4-6分鐘才死亡，在30%糖液中需30分鐘才死亡。一般糖類含量較多的時候最好選用115℃，30分鐘；一般的培養(yǎng)基可選擇121℃20分鐘。

       5、泡沫

       泡沫中的空氣形成隔熱層，使熱量難以滲透進去，殺死其中的雜菌。

       6、顆粒

       顆粒小，容易滅菌，顆粒大，則難滅菌。對于含有少量較大顆粒及粗纖維的培養(yǎng)基，可用粗濾的方法（不應(yīng)影響培養(yǎng)基質(zhì)量）予以除去，培養(yǎng)基結(jié)塊會造成培養(yǎng)基滅菌的不徹底。

       8、滅菌鍋內(nèi)空氣是否排凈

       這個是影響滅菌是溫度和壓力比例關(guān)系的要點，同樣達到了相同的壓力的情況下，如果空氣未能排凈，也就是說不是純蒸汽滅菌，此時的溫度不一定能達到目的要求，會嚴重影響滅菌效果。

       滅菌后的培養(yǎng)基存放時間和保存方式

       1、瓊脂培養(yǎng)基的融化

       將培養(yǎng)基放到沸水浴中或采用有相同效果的方法（如高壓鍋中的層流蒸汽）使之融化。經(jīng)過高壓的培養(yǎng)基應(yīng)盡量減少重新加熱時間，融化后避免過度加熱。融化后應(yīng)短暫置于室溫中（如2min）以避免玻璃瓶破碎。

       融化后的培養(yǎng)基放入47℃～50℃的恒溫水浴鍋中冷卻保溫(可根據(jù)實際培養(yǎng)基凝固溫度適當(dāng)提高水浴鍋溫度)，直至使用，培養(yǎng)基達到47℃～50℃的時間與培養(yǎng)基的品種、體積、數(shù)量有關(guān)。融化后的培養(yǎng)基應(yīng)盡快使用，放置時間一般不應(yīng)超過4h。未用完的培養(yǎng)基不能重新凝固留待下次使用。敏感的培養(yǎng)基尤應(yīng)注意，融化后保溫時間應(yīng)盡量縮短，如有特定要求可參考指定的標(biāo)準(zhǔn)。

       傾注到樣品中的培養(yǎng)基溫度應(yīng)控制在約45℃左右。

       2、平板的制備和儲存

       傾注融化的培養(yǎng)基到平皿中，使之在平皿中形成厚度至少為3mm（直徑90mm的平皿，通常要加入18mL～20 mL瓊脂培養(yǎng)基）。將平皿蓋好皿蓋后放到水平平面使瓊脂冷卻凝固。如果平板需儲存，或者培養(yǎng)時間超過48h或培養(yǎng)溫度高于40℃，則需要傾注更多的培養(yǎng)基。凝固后的培養(yǎng)基應(yīng)立即使用或存放于暗處和（或）5℃±3℃冰箱的密封袋中，以防止培養(yǎng)基成分的改變。在平板底部或側(cè)邊做好標(biāo)記，標(biāo)記的內(nèi)容包括名稱、制備日期和（或）有效期。也可使用適宜的培養(yǎng)基編碼系統(tǒng)進行標(biāo)記。

       將倒好的平板放在密封的袋子中冷藏保存可延長儲存期限。為了避免冷凝水的產(chǎn)生，平板應(yīng)冷卻后再裝入袋中。儲存前不要對培養(yǎng)基表面進行干燥處理。

       對于采用表面接種形式培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基，應(yīng)先對瓊脂表面進行干燥：揭開平皿蓋，將平板倒扣于烘箱或培養(yǎng)箱中（溫度設(shè)為25℃～50℃）；或放在有對流的無菌凈化臺中，直到培養(yǎng)基表面的水滴消失為止。注意不要過度干燥。